Ammoniumacetat 500 g

Alternativ zu Natriumacetat zu verwenden. Als Stammlösungen werden in der Regel eine 10 M Lösung (770 g/L, filtriert) oder 7,5 M Lösung verwendet. Für die Fällung von DNA werden aus einer 7,5 M-Stammlösung NH4OAc 0,5 Vol. der DNA-Lösung zum Ansatz zugegeben (Endkonz. NH4OAc 2,5 M), gemischt und anschließend 2,5 - 3 Vol. (DNA + NH4OAc) Ethanol zugegeben, gemischt und 10 Minuten im Trockeneisbad oder bei -70°C inkubiert. Freie dNTPs und kurze Oligonukleotide werden dabei im Gegensatz zur Fällung mit Natriumacetat nicht mitgefällt! Bei zwei aufeinanderfolgenden Präzipitationen werden 99 % der dNTPs entfernt und > 90 % der DNA gewonnen. Die Qualität Ammoniumacetat-gefällter DNA ist sehr gut für die Transfektion von Säugerzellen geeignet. Dabei ist die Präparation erheblich günstiger, als unter Verwendung von Cäsiumchlorid. Achtung! Ammoniumacetat sollte nicht zur DNA Fällung verwendet werden, wenn im Anschluss an die Fällung die DNA phosphoryliert werden soll, da die entsprechende Kinase durch Ammonium-Ionen gehemmt wird. Für die Fällung von RNA werden aus einer 3 M-Stammlösung NH4OAc (pH 5,5) 0,1 Vol. der RNA-Lösung zum Ansatz zugegeben, gemischt und anschließend 2,5 Vol. (RNA + NH4OAc) Ethanol zugegeben, gemischt und 10 Minuten im Trockeneisbad oder bei -70°C inkubiert. Bei der Herstellung von RNA für Zell-freie Translation kann NH4OAc als Ersatz für Kaliumacetat verwendet werden.