7-Aminoactinomycin D on request

7-Aminoactinomycin D (7-AAD) is a fluorescent chemical compound with a strong affinity for DNA. It is used as a fluorescent marker for DNA in fluorescence microscopy and flow cytometry. It intercalates in double-stranded DNA, with a high affinity for GC-rich regions, making it useful for chromosome banding studies.

7-Aminoactinomycin ist in reiner Form ein orange-roter Feststoff. Prinzipiell besitzt 7-AAD die gleichen Eigenschaften wie die Stammverbindung, das Actinomycin D, es wird jedoch im Gegensatz zu diesem nicht als Zytostatikum eingesetzt. Man nutzt die Fähigkeit des 7-AAD zur Interkalation der DNA aus. Dabei interkaliert 7-AAD spezifisch zwischen Cytosin und Guanin und verändert seine Fluoreszenzeigenschaften. Wie Propidiumiodid, färbt 7-AAD ausschließlich die DNA von ""toten"" Zellen, da 7-AAD nur in Zellen ohne intakte Zellmembran eindringen kann. Man bezeichnet 7-AAD daher auch als Avitalfarbstoff. Diese Eigenschaft wird bei einem Apoptoseassay verwendet. Bei der Apoptose kommt es zu einem Verlust des asymmetrischen Aufbaus der Zellmembran. Das bei vitalen Zellen auf der Innenseite (der cytoplasmatischen Seite) der Membran lokalisierte Phosphatidylserin (PS) tritt dann vermehrt auch in der nach außen gerichteten Membranseite auf. Bei einem Assay zur Bestimmung des Apoptosestadiums wird eine Dopplerfärbung der Zellen mit einem Phosphatidylserin-spezifischem Farbstoff, dem Protein Annexin V und mit 7-AAD durchgeführt. Intakte Zellen reagieren auf beide Färbungen negativ, frühapoptotische Zellen reagieren positiv auf die Färbung mit PS, jedoch negativ auf die mit 7-AAD, spätapoptotische (tote) Zellen reagieren auf beide Färbungen positiv. Auch vollkommen nekrotische Zellen reagieren positiv auf die Färbung mit 7-AAD, jedoch negativ auf die Färbung mit PS. Die Untersuchungen selbst erfolgen in einem Fluoreszenzmikroskop oder im Durchflusszytometer. Bei beiden Verfahren wird die Fluoreszenz durch einen Laser (meist 488 nm) angeregt. Das Emissionsmaximum liegt bei 647 nm.